Siembra de microorganismos 



Siembra
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.

Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:
Que se efectúen asépticamente.
Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados. 
Que se realicen solo los manipuleos indispensables. 
Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un mechero o bien Flujo laminar. 

Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los requerimientos del microorganismo a estudiar. 


Medios sólidos: 

Siembra por inmersión: Se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para microorganismos aerobios. 

Siembra en doble capa: Se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos. 

Siembra en superficie: Se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos. 

Siembra en estría: Se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja solidificar.

Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el objeto es obtener colonias aisladas: 
• Técnica A Consiste en cargar el ansa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta parte de la superficie de la placa, se quema el ansa, se enfría, se gira la placa a 90° y se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de la placa. Por último, sin quemar el ansa, se estría el resto de la superficie sin sembrar. 

• Técnica B Con el ansa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el ansa, se hacen 3 o 4 estrías perpendiculares a las anteriores, se quema el ansa y se repite el procedimiento hasta agotar la superficie de la placa.



















Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: En este caso se colocan 5 ml de medio de cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja enfria







El inóculo se siembra, con ayuda de ansa, de la siguiente manera: 

• En profundidad con ansa de punta: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se introduce mediante punsión en el medio contenido en la parte inferior del tubo.




 • En superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.  





Los instrumentos empleados corrientemente en la siembra son:
1. Asa de Siembra: se utiliza alambre de platino, o alambre de una aleación niquel-cromo (nicrom) que tiene propiedades semejantes a la primera, con la ventaja de ser de menor costo. Este alambre tiene un diámetro de 0,3 a1 mm y esta sujeto a un mango o porta asa metálico o de vidrio. El alambre puede ser totalmente recto (asa en punta o aguja), recto con un anillo de aproximadamente 3 mm de diámetro en la extremidad (asa) o aplastado en el extremo (espátula). Puesto a la llama del mechero alcanza rápidamente el rojo blanco ( 1.300°C ) y también rápidamente se enfría.

2. Pipeta Pasteur: es un tubo de vidrio con una extremidad afilada u cerrada. La otra extremidad que se encuentra abierta está protegida por una mota de algodón cardé o hidrófobo.



La técnica general de siembra dependerá de:
a) Estado físico del material a sembrar ( sólido o líquido ).
b) Estado físico del medio de cultivo ( agar o caldo ). 
c) Ambiente en el cual crece el microorganismo ( aerobiosis, microaerofilia o anaerobiosis ).

AISLAMIENTO Y TRANSPLANTE (TRASPASO)
Cuando se realiza una siembra en medios sólidos es deseable obtener las bacterias en forma asiladas. Sin embargo, generalmente las muestras tienen una flora mixta, que se manifiesta por el desarrollo de distintas especies bacterianas: algunas son saprófitas (flora normal) o contaminantes del proceso de muestreo y otras son las que tienen un rol patógeno.
Para realizar diagnósticos microbiológicos el organismo debe ser primero aislado y mantenido puro en condiciones de laboratorio.
Si en la placa de agar ha crecido más de un tipo de bacterias, se debe realizar el aislamiento de 1 colonia a otro medio de cultivo semejante o a medios selectivos.
Si fuese necesario las colonias se someterán a uno o más re-aislamientos, hasta obtener cultivos puros; es decir, presenten la misma morfología y microscópicamente correspondan a un solo tipo de bacteria.
Sólo en este momento se puede proceder a la identificación de la especie bacteriana mediante el traspaso de 1 sola colonia a una batería de medios diferenciales.



Bibliografia

  • Eduardo Santambrosio, (2009), CATEDRA DE BIOTECNOLOGIA, 9/03/18,UNIVERSIDAD TECNOLOGICA NACIONAL FACULTAD REGIONAL ROSARIO DEPARTAMENTO DE INGENIERIA QUIMICA, Sitio web: https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pdf
  • Felipe Martínez, (2017), Microbiología/Obtención de cultivos puros: siembra y aislamiento, 9/03/18, Wikilibros , sitio web: https://es.wikibooks.org/wiki/Microbiología/Obtención_de_cultivos_puros:_siembra_y_aislamiento
  • Erika Beatriz Álvarez Hidalgo, (2015), Técnicas de siembras de microorganismos, 9/03/18, Slideshare, sitio web: https://es.slideshare.net/rebecaoloarte/tecnicas-de-siembra-de-microorganismos
  • Stephy Barrientos, (2014), Métodos de siembra de microorganismos, 9/03/18, A, Sitio web:http://www.academia.edu/8913069/MÉTODOS_DE_SIEMBRA_DE_MICROORGANISMOS
  • Alessandro Gónzalez, Técnicas de cultivo y siembra de microorganismos y el uso de cepas de referencia, 9/03/18, Prezi, sitio web: https://prezi.com/w8shvbuie57l/tecnicas-de-cultivo-y-siembra-de-microorganismos-y-el-uso-de/

 Integrantes del equipo:

  • Andrea Soledad Parrales Argueta
  • Alison Estefania Vargas Argueta
  • Maria Jared Zavala Diaz
  • Aurea Alejandra Ruiz Coral
  • José Cristóbal Trujillo Flores
  • Luis Manuel Merino Silva
  • Stefany Rebeca Sámano Arenas
  • Osmar Jared Vega Solache
  • María de Jesús Ibarra Ruiz








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